1、DiD、DiO、DiI、DiR和DiS細(xì)胞膜染色液的制備
(1)DMSO或EtOH儲存溶液的制備：應(yīng)制備濃度為1~5mM的DMSO和EtOH-儲存溶液。
注：未使用的儲存溶液應(yīng)在-20℃下儲存，以避免反復(fù)冷凍和解凍。
(2)工作溶液的制備：用合適的緩沖溶液(如無血清培養(yǎng)基、HBSS或PBS)稀釋儲存溶液，制備濃度為1-5µM的工作溶液。
注：工作溶液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)制備的。在建議濃度的十倍以上可以找到良好的條件。
2、懸浮細(xì)胞染色
(1)懸浮池密度為1×向工作溶液中添加106/mL。
(2)當(dāng)細(xì)胞在37℃培養(yǎng)2至20分鐘時(shí)，不同的細(xì)胞可以培養(yǎng)不同的時(shí)間。
(3)染色細(xì)胞管以1000～1500rpm離心5分鐘。
(4)倒入上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)液。
(5)重復(fù)步驟(3)和(4)兩次以上。
3、貼壁細(xì)胞染色
(1)貼壁細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)。
(2)從培養(yǎng)基中取出蓋玻片，吸出多余的培養(yǎng)液，并將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
(3)將100加到蓋玻片μL染料工作液的一角，輕輕搖動，使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
(4)當(dāng)細(xì)胞在37℃培養(yǎng)2至20分鐘時(shí)，不同的細(xì)胞可以培養(yǎng)不同的時(shí)間。
(5)吸取染料工作液，用培養(yǎng)液清洗蓋玻璃2-3次，每次用預(yù)熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5-10分鐘，然后吸取培養(yǎng)基。
