在室溫中對ecl超敏發光液進行實驗操作要注意些什么
方法/步驟1:
常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。以下操作在室溫進行。
方法/步驟2:
新鮮配制發光工作液。將BufferA和BufferB按1:1比率混合，制成發光工作液(每25px2膜需要0.125ml發光工作液)。轉移到清潔的塑料小盒中。
方法/步驟3:
用鑷子將漂洗過的膜取出，將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的洗液，但勿使膜*干燥。將膜轉移至有發光工作液的塑料小盒中，使其*浸泡，輕輕搖晃，室溫孵育幾十秒到1分鐘。
方法/步驟4:
用鑷子將膜夾起5-10秒，并將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的發光液，迅速將膜*包裹于潔凈保鮮膜內，去除氣泡和褶皺，蛋白面朝上固定于X片暗盒內。
方法/步驟5:
在黑暗中一次重疊放入3張X光膠片，30分鐘或更長時間后全部取出顯影。
方法/步驟6:
對同一張膜進行多次蛋白雜交：用PBST或TBST洗滌掉發光液（10min×3次），然后從開始一抗雜交即可。
注意事項
優化一抗和二抗的比例
選擇高質量的膜
ecl超敏發光液的注意事項
1.為獲得*實驗結果，請務必優化實驗條件，包括檢測樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇，并且發光液請現用現配。
2.建議在封閉緩沖液及所有抗體稀釋液中加入高質量的吐溫-20（終濃度為0.05%），以減少非特異性結合。
3.由于疊氮鈉是HRP抑制劑，在緩沖液中應避免使用疊氮鈉作為防腐劑。
4.免疫印跡實驗進行全過程中，請確保印跡膜始終處于濕潤狀態，避免干燥。
5.在與膜發生接觸過程中請佩戴手套或者使用潔凈鑷子，避免蛋白污染。
6.實驗過程中，請使用潔凈器材。保證非金屬設備沒有明顯劃痕，金屬設備表面無銹。銹可能導致膜上帶有污點或者高背景。
以上便是今天關于在室溫中對ecl超敏發光液進行實驗操作要注意些什么的全部分享了，希望對大家今后使用本設備能有幫助。
