CCK-8試劑盒是一種常用于細胞增殖和細胞代謝活性檢測的實驗工具,其主要檢測原理是基于細胞代謝活性的變化。CCK-8試劑盒中的CCK-8是一種水溶性的四唑鹽類化合物,其能夠通過線粒體呼吸鏈的活性被代謝為形成橙色的水溶性產物,該產物可以通過吸光度檢測的方式來間接反映細胞代謝活性的變化。
1、細胞接種和處理:首先,將待檢測的細胞接種在培養皿中,并在培養基中添加不同的藥物處理或其他實驗條件,通過控制實驗條件來研究細胞的生長和代謝活性變化。
2、加入CCK-8試劑:在實驗處理一定時間后,將CCK-8試劑加入到細胞培養物中,CCK-8會被活性細胞內的線粒體呼吸鏈代謝,形成橙色的水溶性產物。
3、檢測吸光度:將培養皿中的細胞培養物轉移至微孔板中,然后使用酶標儀或分光光度計等設備測量吸光度,通常在450納米波長下測量吸光度,橙色產物的光學密度與細胞代謝活性呈正相關。
4、數據分析:根據測得的吸光度值,可以通過標準曲線或內部控制樣品來計算細胞的代謝活性,進而分析不同處理條件對細胞生長和代謝的影響。
CCK-8試劑盒基于WST-8還原反應的原理,通過測定細胞代謝活性相關的吸光度值,間接反映細胞的增殖和存活情況。其優點在于其操作簡便、靈敏度高、結果穩定可靠,廣泛應用于細胞生物學、藥理學、毒理學等領域的研究中。通過使用,可以快速、準確地評估細胞的代謝活性,為細胞生物學研究提供了重要的實驗數據支持。