CCK-8試劑盒利用了同仁化學研究所(Dojindo)開發的四唑鹽——WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-MethoxyPMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。
 

　　CCK-8試劑盒的檢測步驟：
 

　　1、向各孔中加入100μl細胞懸液。
 

　　2、在37℃下預孵育培養板。
 

　　3、向各孔中加入各濃度的待測溶液10μl。
 

　　4、37℃下孵育。
 

　　5、向各孔中加入10μl的CCK-8溶液。
 

　　6、37℃下孵育1-4小時。
 

　　7、測定450nm處的OD值。
 

　　CCK-8試劑盒的使用注意事項：
 

　　(1)使用適當的培養基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。
 

　　(2)建議使用CO2培養箱過夜預培養。
 

　　(3)使用培養基或PBS來制備溶液。
 

　　(4)如果待測溶液有還原性，測定不含細胞，但含有CCK-8的待測溶液在450nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的100μl培養基和10μlCCK-8進行檢測。
 

　　(5)白細胞可能需要培養較長時間。